OZ Biosciences：脂質轉染試劑

基本原理：

脂質轉染（Lipofection）是一種基于脂質的轉染技術，屬于生物化學方法，包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸鈣。脂質轉染原理是將核酸與陽離子脂質制劑結合。由此產生的分子復合物，稱為脂質體，然后被細胞吸收。脂質轉染的主要優點是效率高，能夠在廣泛的細胞類型中轉染所有類型的核酸，易于使用，可重復性強，毒性低。此外，該方法適用于所有轉染應用（瞬時、穩定、共轉染、反向、順序或多次轉染……）、高通量篩選測定，并且在一些體內模型中也顯示出良好的效率。  

工作原理：

（1）DNA轉染機制：

用于脂質轉染的脂基試劑通常由合成的陽離子脂質組成，其通常與輔助脂質如DOPE（L-α-二油酰磷脂酰乙醇胺）或膽固醇混合。這些脂質混合物在生理pH值下以整體帶正電荷的脂質體或膠束形式組裝，并能夠通過靜電相互作用與帶負電荷的核酸形成復合物（脂質復合物）。脂基轉染試劑與核酸的結合使核酸受到緊密壓縮和保護，這些陽離子復合物主要通過內吞作用內化。一旦進入細胞，有兩種導致核酸釋放到細胞質中的機制。一種依賴于多陽離子殘基的核內體緩沖能力（稱為“質子海綿效應”）。另一種是細胞帶負電荷的脂質中和轉染試劑的陽離子殘基導致內體膜不穩定的能力。最后，導致核攝取DNA（siRNA不需要）隨后基因表達的細胞和分子事件仍然是高度推測性的。然而，細胞分裂對轉染效率的重要性有利于有絲分裂過程中核膜破壞促進DNA核攝取的假設。盡管如此，通過脂質轉染也可以實現原代細胞（非分裂）和體內的轉染，這表明DNA可以進入發生基因表達的細胞核。

（2）Tee-技術（Tee-Technology）：

陽離子脂質體（脂質復合物）和聚合物（多聚體）是最常用的非病毒基因遞送系統。 Tee-Technology（觸發內體逃逸）結合并利用這兩種實體的特性來實現極其高效的核酸傳遞到細胞中。實際上，這種新一代的脂多胺含有親脂性部分，如脂質，和帶電荷的多胺部分，如陽離子聚合物。這些部分協同作用以確保核酸的緊密壓縮和保護，以及核內體膜的非常有效的不穩定，這允許大量核酸在細胞質中釋放和DNA的核攝取。特別關注完全可生物降解實體的合成。通過這種方式，轉染試劑不會干擾細胞機制，在每次實驗中都能保持高細胞活力，并避免任何潛在的副作用。

Tee-技術的主要優勢在于：

• 納米顆粒中DNA的壓縮被細胞有效地內化；

• 核酸對核酸酶降解的保護作用；

• 有效的膜不穩定性和DNA遞送；

• 即使在核酸含量較低的情況下也具有高效性；

• 生物降解性。

應用：

轉染效率與高基因表達水平或高基因沉默和最小化細胞毒性相結合取決于多個關鍵參數。這些因素包括細胞類型、質粒DNA特征（大小、啟動子、報告基因）和純度、siRNA序列和純度、細胞培養條件（含或不含血清的培養基、細胞數量、無污染......）、核酸和試劑的量、轉基因檢測等等。 因此，轉染試劑需要根據待遞送的核酸（DNA、siRNA、mRNA、ODN、shRNA等）和使用的細胞類型進行專門設計，以達到最佳效率。在此背景下，OZ Biosciences開發了幾種出色的轉染試劑： 

DreamFect Gold：適用于所有核酸，獲得卓越的轉基因表達水平 

DreamFect：適用于所有核酸，適用于所有細胞，包括懸浮細胞系

Lullaby：用于siRNA應用 

VeroFect：用于Vero細胞轉染 

FlyFectin：用于昆蟲細胞轉染

EcoTransfect：用于流行的細胞系和低成本的常規轉染  

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如何使用脂質轉染試劑？

該protocol是一個非常簡單明了的程序，大體流程如下：

1. 制備DNA和轉染試劑溶液。

2. 將它們混合在一起并孵育20分鐘。

3. 添加到您的細胞中。

產品引用文章鑒賞：

1. Ferrari, R., Martin, G., Tagit, O. et al. MT1-MMP directs force-producing proteolytic contacts that drive tumor cell invasion. Nature Communications10, 4886 (2019).. （使用OZ Biosciences的Lullaby脂質轉染）

2. Karousis, E.D., Gurzeler, LA., Annibaldis, G. et al. Human NMD ensues independently of stable ribosome stalling. Nature Communications11, 4134 (2020). （使用OZ Biosciences的Lullaby脂質轉染）

3. Ramsay, E.P., Abascal-Palacios, G., Dai?, J.L. et al. Structure of human RNA polymerase III. Nature Communications11, 6409 (2020).  （使用OZ Biosciences的Lullaby脂質轉染）